以下是關于?大鼠4-羥基雌二醇(4-OH-E2)試劑盒?的實驗說明書核心內(nèi)容整理：

　　一、實驗原理?

　　采用?雙抗體夾心法?檢測樣本中4-OH-E2含量：

　　包被抗體的微孔板捕獲樣本中的4-OH-E2，形成固相抗體-抗原復合物?;

　　加入HRP標記的抗體后，復合物與酶標抗體結合，經(jīng)洗滌后加TMB顯色?;

　　顏色深淺與4-OH-E2濃度正相關，450nm波長下測定OD值?。

　　二、試劑盒組成?

　　組分? ?規(guī)格? ?用途?

　　酶標包被板 12孔×8條 固相抗體載體?

　　標準品(400ng/L) 0.5ml/瓶 繪制標準曲線?

　　酶標試劑 6ml/瓶 HRP標記抗體?

　　顯色劑(TMB A/B液) 各6ml/瓶 顯色反應?

　　終止液 6ml/瓶 終止顯色反應?

　　三、樣本處理要求?

　　血清/血漿?：EDTA抗凝血漿需5,000×g離心15分鐘(4℃)，分離后-80℃保存?;

　　稀釋要求?：樣本需用試劑盒提供的稀釋液按1:5比例稀釋(如10μl樣本+40μl稀釋液)?;

　　禁忌?：含NaN3的樣本會抑制HRP活性，需避免使用?。

　　四、操作步驟?

　　標準品稀釋?：將原倍標準品按梯度稀釋至12.5-200ng/L?;

　　加樣?：標準孔加50μl標準品，樣本孔先加40μl稀釋液，再加10μl樣本?;

　　溫育?：37℃孵育30分鐘，洗滌5次?;

　　顯色?：加入TMB A/B液各50μl，37℃避光顯色15分鐘?;

　　終止與檢測?：加終止液50μl，15分鐘內(nèi)測定450nm OD值?。

　　五、注意事項?

　　重復凍融?：樣本避免反復凍融，-20℃保存需分裝?;

　　洗板?：手工洗板需防止交叉污染，自動洗板機建議增加30秒浸泡步驟?;

　　顯色控制?：TMB若變藍則失效，終止后黃色需及時檢測?。

　　六、性能參數(shù)?

　　靈敏度?：<10pg/ml?;

　　精密度?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<15%?;

　　有效期?：6個月(2-8℃避光保存)?。

　　如需完整說明書，可下載原始文檔或聯(lián)系供應商?。

　　注：以上資料僅供參考，不同品牌產(chǎn)品可能存在設計差異，操作前建議參考說明書?。

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