ELISA試劑盒操作流程中哪些步驟最關(guān)鍵?  天津天正信達(dá)  Elisa試劑盒

　　一、ELISA試劑盒操作流程及技術(shù)要點(diǎn)

　　加樣細(xì)節(jié)‌：

　　使用專(zhuān)用加樣器，避免氣泡產(chǎn)生，槍頭不可觸及孔壁。

　　不同試劑更換吸頭，防止交叉污染。

　　加樣量需準(zhǔn)確，避免孔間不一致。

　　孵育控制‌：

　　嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)溫度(通常37℃)和時(shí)間(如1小時(shí))孵育，避免溫度波動(dòng)。

　　孵育期間確保酶標(biāo)板平放，避免液體溢出。

　　洗滌性‌：

　　洗滌液現(xiàn)用現(xiàn)配，每孔注滿洗滌液，浸泡時(shí)間一致(30-60秒)。

　　甩板時(shí)快速翻轉(zhuǎn)120-150度，避免殘留液體污染相鄰孔。

　　樣本處理‌：

　　避免溶血和反復(fù)凍融，分裝后-20℃或-70℃保存。

　　混勻時(shí)輕柔顛倒，避免劇烈振蕩。

　　試劑保存‌：

　　試劑盒4℃-8℃冷藏，避免冷凍;使用前室溫回溫40-60分鐘。

　　標(biāo)準(zhǔn)品分裝后-20℃保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

　　二、常見(jiàn)問(wèn)題及預(yù)防措施

　　背景顏色深/非特異性染色‌：

　　原因：洗滌不充分、試劑污染、顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

　　措施：嚴(yán)格洗滌步驟，更換吸頭，控制顯色時(shí)間。

　　所有孔均無(wú)明顯顏色‌：

　　原因：試劑混淆、酶標(biāo)物失活、遺漏步驟。

　　措施：核對(duì)試劑標(biāo)簽，檢查有效期，按流程操作。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳‌：

　　原因：標(biāo)準(zhǔn)品配制錯(cuò)誤、儲(chǔ)存不當(dāng)、稀釋過(guò)早。

　　措施：現(xiàn)配現(xiàn)用，避免室溫放置過(guò)久，按說(shuō)明書(shū)稀釋。

　　重復(fù)性差‌：

　　原因：加樣不準(zhǔn)、孔間污染、儀器問(wèn)題。

　　措施：校準(zhǔn)加樣器，避免交叉污染，定期維護(hù)儀器。

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。

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