產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

     本產(chǎn)品HRbio™ miRNA RT-qPCR Detection Kit包含miRNA檢測的全部試劑。本制品采用Poly（A）加尾法，以miRNA為模板，采用特殊優(yōu)化預(yù)混合miRNA RT Enzyme mix（包含 Poly(A)加尾酶和逆轉(zhuǎn)錄酶）將 Poly(A)加尾和逆轉(zhuǎn)錄一步法高效完成cDNA 合成；miRNA檢測使用 2×miRNA qPCR Mix。適用于Total RNA或者small RNA等包含 miRNA 的樣品。

產(chǎn)品特點

1. Poly(A)加尾酶和反轉(zhuǎn)錄酶配比及優(yōu)化的反應(yīng)buffer，確保miRNA 的逆轉(zhuǎn)錄效率。

2.PolyA 加尾和逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成在同一管內(nèi)一步法完成。

3.2×miRNA qPCR Mix 擴增效率高，特異性強和靈敏度高。

4.配套ROX Reference Dye，可以用于各種需要高低 ROX 參比染料的機型。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

干冰運輸。-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期1年。

使用方法

一、miRNA 3’末端進(jìn)行Poly (A)加尾和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（鏈合成）

1.解凍2×miRNA RT Reaction Mix并混勻，miRT Enzyme Mix放于冰中備用，加入以下試劑至總體積20μl(注意：最后加入miRNA RT Enzyme Mix)

2.移液器輕輕混勻上述配制的反應(yīng)液，短暫離心后在42°C反應(yīng)60 min。

3.85°C加熱5秒鐘失活miRNA RT Enzyme Mix。

4.合成的cDNA反應(yīng)液可放置于-20°C保存；也可以直接進(jìn)行下游PCR或者熒光定量PCR檢測。

注意事項

1.miRNA RT Enzyme Mix比較粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失，用前請點甩離心，并且避免吸頭外壁沾附損失。Enzyme Mix內(nèi)酶都是過量的，即使每次按照 1.8μl使用，也不影響使用效果。

2.在反應(yīng)中使用的total RNA 必須包含有小分子RNA(miRNA)。此過程也可以使用富集的miRNA， 單純miRNA無法直接用分光光度計定量，建議直接加入2μl ~5μl?？筛鶕?jù)目的miRNA豐度決定加入量，但是對于低豐度miRNA 樣品而言(如血清血漿提取物)，可直接加入體積8 μl。

3.按照上述操作步驟得到的cDNA模板用于下游PCR或者熒光定量PCR檢測時，可以根據(jù)實際情況選擇使用量，對于特殊的檢測體系中，高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴增，可根據(jù)所檢測miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA（5-10倍或者100倍）后使用。如果發(fā)現(xiàn)有非特異擴增條帶，或者溶解曲線顯示有非特異擴增，往往提示cDNA模板過量， 可以嘗試將上述cDNA模板稀釋幾十到幾百倍甚至上千倍再使用。miRNA逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測試劑盒

4、本產(chǎn)品僅作科研用途！