人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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　　BS-0186 人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法(或雙抗原夾心法)檢測樣本中KGF濃度。通過包被抗體/抗原與待測物結(jié)合，再與酶標抗體形成復合物，經(jīng)TMB顯色后測定OD值，濃度與顏色深淺成正比。

　　二、試劑盒組成

　　主要組分?

　　預包被微孔板(96孔或48孔)

　　標準品(凍干粉，通常含2-8管，濃度0-400 pg/mL不等)

　　酶標抗體、生物素化抗體、HRP標記親和素(不同品牌配置差異)

　　TMB底物液、終止液(2N H?SO?)

　　濃縮洗滌液(需20-30倍稀釋)

　　自備物品?

　　酶標儀(450nm)、移液器及槍頭

　　37℃恒溫箱、蒸餾水

　　三、樣本處理

　　樣本類型 處理方法

　　血清? 室溫凝固10-20分鐘后，2000-3000rpm離心20分鐘，避免溶血

　　血漿? EDTA/肝素抗凝，離心后取上清

　　細胞上清? 1000-3000rpm離心10-20分鐘去除顆粒

　　組織勻漿? PBS勻漿后離心取上清，分裝保存于-20℃

　　注意?：避免反復凍融;NaN?會抑制HRP活性，需排除此類樣本。

　　四、操作步驟

　　試劑準備?

　　標準品復溶：加入指定體積稀釋液(如0.5-1mL)，靜置10分鐘混勻。

　　洗滌液稀釋：按1:19~1:20比例用蒸餾水配制。

　　檢測流程?

　　加樣：標準品/樣本每孔50-100μL。

　　孵育：37℃溫育60-120分鐘。

　　洗板：手工或洗板機洗滌4-6次，拍干。

　　加酶標抗體：每孔100μL，37℃孵育60分鐘。

　　顯色：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘。

　　終止：加入終止液后15分鐘內(nèi)測定450nm OD值。

　　五、注意事項

　　保存條件?：未開封試劑盒2-8℃保存;溶解后標準品建議分裝凍存。

　　精密度?：批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%。

　　干擾因素?：溶血、細菌污染、反復凍融可能導致假陽性或濃度偏差。

　　注：以上資料僅供參考，如需具體品牌說明可進一步提供貨號查詢詳細參數(shù)。