人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書
 

　　BS-0083人瘦素(LEP)ELISA試劑盒
 

　　以下是綜合多個高可信度來源整理的人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書，涵蓋實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
 

　　一、實(shí)驗(yàn)原理‌
 

　　采用雙抗體夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA)。純化的抗LEP抗體包被微孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本、生物素標(biāo)記抗體及HRP標(biāo)記親和素，形成復(fù)合物。TMB顯色后，顏色深淺與瘦素濃度呈正相關(guān)，通過450nm波長測定OD值計算濃度。
 

　　二、試劑盒組成‌
 

　　組分 規(guī)格/說明 保存條件
 

　　預(yù)包被微孔板 96孔 2-8℃
 

　　標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉(濃度梯度0.15-50ng/mL) -20℃
 

　　生物素標(biāo)記抗體 100μL(1:100稀釋) 2-8℃
 

　　HRP標(biāo)記親和素 100μL(1:100稀釋) 2-8℃
 

　　顯色劑A/B液 各6mL 避光2-8℃
 

　　終止液 6mL(2N H?SO?) 2-8℃
 

　　20×洗滌緩沖液 20mL 室溫(結(jié)晶需水浴溶解)
 

　　三、樣本處理‌
 

　　血清/血漿‌
 

　　室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000×g，20分鐘)，避免溶血。
 

　　血漿需EDTA/肝素抗凝，離心后取上清。
 

　　組織勻漿‌
 

　　按1:9(w/v)加入PBS勻漿，離心取上清。
 

　　細(xì)胞上清‌
 

　　直接離心(2000×g，10分鐘)去除顆粒。
 

　　保存條件‌：-20℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
 

　　四、操作步驟‌
 

　　試劑平衡‌：從冰箱取出后室溫平衡20分鐘。
 

　　加樣‌
 

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔‌：加入50μL梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。
 

　　樣本孔‌：加入10μL樣本+40μL樣本稀釋液。
 

　　溫育‌
 

　　37℃孵育60分鐘，洗滌后加入生物素抗體，再孵育30分鐘。
 

　　顯色與終止‌
 

　　TMB顯色15分鐘，加終止液后15分鐘內(nèi)測OD值。
 

　　五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)‌
 

　　洗滌‌：手工洗板需拍干，自動洗板機(jī)每孔加350μL洗滌液。
 

　　顯色控制‌：避免顯色時間過長導(dǎo)致背景升高。
 

　　儀器校準(zhǔn)‌：使用前確認(rèn)酶標(biāo)儀波長準(zhǔn)確性。
 

　　六、結(jié)果計算‌
 

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計算。若樣本OD值超出范圍，需用稀釋液稀釋后重測。
 

　　注：以上資料僅供參考，本試劑盒僅用于科研，不可用于臨床診斷。
 

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