在ELISA實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確區(qū)分已加樣孔和未加樣孔至關(guān)重要，可避免重復(fù)加樣或漏加樣，從而保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。以下是幾種實(shí)用的區(qū)分方法：

　　1. 物理標(biāo)記法(推薦)

　　(1) 使用可擦寫板蓋標(biāo)記

　　工具：防水實(shí)驗(yàn)室記號(hào)筆(如VWR或Thermo Scientific品牌)或可擦寫標(biāo)簽貼。

　　方法：

　　加樣后立即在板蓋對(duì)應(yīng)孔位置畫“?"或標(biāo)注樣本編號(hào)。

　　結(jié)束后用酒精棉片擦拭干凈，方便重復(fù)使用。

　　優(yōu)點(diǎn)：直觀、操作快捷，適合手工操作。

　　(2) 孔位布局規(guī)劃

　　模板化加樣：

　　提前設(shè)計(jì)加樣順序(如“從左到右，逐行加樣")，并用空白對(duì)照孔作為分界標(biāo)記。

　　示例：第1行加標(biāo)準(zhǔn)品，第2行加待測(cè)樣本，第3行留空(陰性對(duì)照)。

　　2. 可視化輔助法

　　(1) 液體高度觀察

　　適用情況：加樣量≥50 μL時(shí)。

　　方法：

　　傾斜微孔板，觀察孔內(nèi)液面反光(已加樣孔可見(jiàn)明顯液面，未加樣孔為干燥狀態(tài))。

　　注意：需在白色背景光下觀察，避免強(qiáng)光直射。

　　(2) 顯色預(yù)判(針對(duì)彩色樣本)

　　適用樣本：含血紅蛋白(紅色)、細(xì)胞裂解液(渾濁)等有色樣本。

　　方法：直接通過(guò)顏色區(qū)分，但需注意無(wú)色樣本(如緩沖液)不適用。

　　3. 技術(shù)輔助法

　　(1) 多通道移液器同步加樣

　　操作：

　　使用8通道或12通道移液器，按行/列一次性加樣(避免單孔遺漏)。

　　加樣后移液器槍頭仍停留在孔中，作為物理標(biāo)記。

　　優(yōu)點(diǎn)：高效且不易出錯(cuò)，適合高通量實(shí)驗(yàn)。

　　(2) 自動(dòng)化記錄

　　電子表格跟蹤：

　　提前在Excel中繪制96孔板模板，加樣后實(shí)時(shí)填寫孔位狀態(tài)。

　　示例：

　　孔位A1  A2  A3...

　　樣本S1  S2  NC...

　　4. 防錯(cuò)設(shè)計(jì)(預(yù)防漏加/重復(fù)加樣)

　　(1) 板架分區(qū)

　　將微孔板放置在標(biāo)有“已加樣"和“未加樣"區(qū)域的板架上，加樣后移動(dòng)位置。

　　(2) 雙人核對(duì)

　　一人加樣，另一人實(shí)時(shí)核對(duì)記錄，尤其適用于臨床樣本檢測(cè)。

　　5. 疑難問(wèn)題解決

　　問(wèn)題：加樣后液體揮發(fā)，難以辨別是否已加樣。

　　解決：

　　縮短加樣到孵育的時(shí)間間隔(如分批加樣)。

　　使用帶密封蓋的微孔板(防止蒸發(fā))。

　　問(wèn)題：部分孔因氣泡干擾觀察。

　　解決：加樣后離心微孔板(1000 ×g，1分鐘)去除氣泡。

　　總結(jié)

　　方法適用場(chǎng)景注意事項(xiàng)

　　板蓋標(biāo)記法手工操作、少量樣本需使用可擦寫筆

　　液體高度觀察加樣量≥50 μL需良好光線條件

　　多通道移液器同步加樣高通量實(shí)驗(yàn)需校準(zhǔn)移液器通道一致性

　　電子表格記錄復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(如多批次樣本)需實(shí)時(shí)更新記錄

　　推薦策略：

　　常規(guī)實(shí)驗(yàn)：板蓋標(biāo)記 + 多通道移液器。

　　高通量檢測(cè)：自動(dòng)化記錄 + 雙人核對(duì)。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，如需完整版產(chǎn)品信息請(qǐng)咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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