ELISA實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：血液樣本收集/處理簡(jiǎn)要?

　　在ELISA實(shí)驗(yàn)中，血液樣本的收集至關(guān)重要。需使用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集靜脈血，室溫放置1小時(shí)或4℃過(guò)夜，使血清析出。隨后，在2-8℃條件下以1000×g離心20分鐘，收集上清液作為血清樣本。若采集血漿，則需使用含抗凝劑的采血管，采集后30分鐘內(nèi)，在4℃條件下以1000×g離心15分鐘，取上清液。此外，還需注意避免溶血和細(xì)菌污染，溶血會(huì)釋放具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，細(xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，這些都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。處理后的血清或血漿應(yīng)分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。

　　ELISA實(shí)驗(yàn)的血液樣本收集與處理是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵步驟，以下為簡(jiǎn)要操作要點(diǎn)：

　　一、血液樣本收集

　　采集類型：

　　血清：用于檢測(cè)抗體、抗原等(如無(wú)抗凝管采集)。

　　血漿：需抗凝劑(如EDTA、肝素、檸檬酸鈉)防止凝固，用于特定分子檢測(cè)(如細(xì)胞因子)。

　　注意事項(xiàng)：

　　無(wú)菌操作：避免污染。

　　采血管選擇：根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)選擇抗凝劑(避免EDTA干擾某些酶聯(lián)反應(yīng))。

　　采集量：通常3-5mL，避免溶血或脂血(影響吸光度)。

　　二、樣本處理

　　血清制備：

　　血液靜置30-60分鐘(室溫凝固)。

　　離心(2000-3000×g，10-15分鐘，4℃或室溫)。

　　吸取上清(血清)，避免觸碰沉淀或脂層。

　　血漿制備：

　　采血后立即輕柔顛倒混勻抗凝劑。

　　離心(同上條件)分離血漿。

　　分裝保存：

　　分裝至無(wú)菌EP管(避免反復(fù)凍融)。

　　短期(24-48小時(shí))：4℃保存。

　　長(zhǎng)期：-20℃(1個(gè)月內(nèi))或-80℃(更久)，標(biāo)記日期/樣本信息。

　　三、關(guān)鍵控制點(diǎn)

　　避免溶血/脂血：離心后若血清呈紅色或渾濁，可能影響OD值。

　　及時(shí)處理：血液室溫放置≤2小時(shí)，否則釋放代謝物干擾結(jié)果。

　　凍融次數(shù)：≤3次，建議分裝小體積。

　　四、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　檢測(cè)前樣本需平衡至室溫，離心去除沉淀(尤其凍存樣本)。

　　高脂樣本可過(guò)濾或超速離心澄清。

　　規(guī)范化的樣本處理可顯著減少ELISA的假陽(yáng)性/假陰性風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)具體試劑盒要求調(diào)整細(xì)節(jié)(如某些檢測(cè)需特殊抗凝劑)。

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