產(chǎn)品速遞：RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書

　　RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書

　　RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒用于將RNA模板反轉(zhuǎn)錄為cDNA，適用于RT-PCR、Real-Time PCR等實(shí)驗(yàn)。以下是主要內(nèi)容和操作指南：

　　1. ?產(chǎn)品概述?

　　HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit?：包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶HiScript III Reverse Transcriptase和優(yōu)化的Buffer，提高一鏈合成效率。5 × gDNA wiper Mix可在42℃下2分鐘快速去除基因組DNA?。

　　PrimeScript RT reagent Kit?：使用PrimeScript RTase從Total RNA或PolyA+ RNA合成cDNA，適用于長片段(12kb)和復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA?。

　　2. ?試劑盒組成?

　　HiScript III Kit?：包含HiScript III Reverse Transcriptase、5 × gDNA wiper Mix、dNTP Mix等?。

　　PrimeScript Kit?：包含PrimeScript RTase、5× PrimeScript Buffer、RNase Inhibitor、dNTP Mixture、Oligo dT Primer、Random 6mers等?。

　　3. ?操作步驟?

　　RNA模板準(zhǔn)備?：建議使用10ng至5μg總RNA或1至100ng mRNA，低濃度RNA可加入MS2 RNA處理?。

　　反應(yīng)體系配制?：按說明書比例混合RNA模板、引物、dNTP、Buffer和逆轉(zhuǎn)錄酶?。

　　逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)?：42℃反應(yīng)60分鐘，95℃加熱5分鐘滅活酶?。

　　cDNA保存?：產(chǎn)物可短期保存于-20℃，長期保存于-80℃?。

　　4. ?注意事項(xiàng)?

　　引物選擇?：建議使用六聚寡核苷酸引物和Oligo(dT)18組合，保證產(chǎn)量和靈敏度?。

　　反應(yīng)條件?：避免高溫反轉(zhuǎn)錄，防止RNA降解?。

　　cDNA使用?：建議在Real-Time PCR中使用5% cDNA模板，濃度過高需稀釋，過低需加倍?。

　　5. ?應(yīng)用場景?

　　RT-PCR?：用于基因表達(dá)分析、cDNA克隆等?。

　　Real-Time PCR?：適用于定量分析RNA表達(dá)水平?。

　　6. ?常見問題?

　　cDNA質(zhì)量驗(yàn)證?：建議通過Real-Time PCR驗(yàn)證內(nèi)參基因?。

　　非特異性擴(kuò)增?：使用Hot Start型DNA聚合酶抑制非特異性擴(kuò)增?。

　　以上內(nèi)容綜合了HiScript III和PrimeScript試劑盒的說明書，適用于實(shí)驗(yàn)室RNA逆轉(zhuǎn)錄操作?。

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